Watts FLU 25 реле протока
Реле протока Watts FLU 25 используется для контроля протока воды. Монтируется горизонтально. Для труб 1″ — 8″. Рабочая температура до 110 градусов С. Рабочее давление до 10 бар. Реле протока предустановлено на минимальное значение расхода. Переключатель 220В — 6А — 50Гц.
Реле протока используется для контроля наличия протока воды в автономной отопительной системе с принудительной циркуляцией, вплоть до минимальных значений расхода. В зависимости от схемы подключения реле протока может включать либо выключать соответствующий элемент автономной отопительной системы при исчезновении либо появлении протока теплоносителя. Например, при отключении циркуляционного насоса может быть отключена горелка. Реле протока может также использоваться для защиты циркуляционного насоса от сухого хода. Реле протока Watts FLU 25 имеет металлический корпус и может устанавливаться в помещениях с высокой влажностью. Наличие пружинного сильфона (сильфонного уплотнения) делает реле протока Watts FLU 25 также пригодным для дизельного топлива. В комплект поставки входят пластинки (ламели) различной длины для труб 1” – 8”
Технические характеристики FLU 25
- Микропереключатель (реле) 6 А – 220 В
- Максимальное рабочее давление 10 бар.
- Максимальная температура теплоносителя 110°С
- Максимальная температура окружающей среды 60°С
- Класс защиты IP 54
- Наружная резьба 1”
Регулировка реле протока:
Порог срабатывания (рабочая точка) определяется напряжением пружины (10), установкой винта (8) и длиной ламели (7).
В приведённой ниже таблице указаны диаметры труб, соответствующие длины ламелей и расход воды в м3/ч, при которых происходит замыкание или размыкание контактов микропереключателя, как при установке минимального значения (винт плотно затянут), так и при установке максимального значения (винт полностью ослаблен).
Устройство поставляется с плотно затянутым калибровочным винтом (установлено минимальное значение). Контакт 1 — 2 разомкнут. После запуска насосов или при установлении номинального расхода воды, ламель должна сместиться в направлении потока воды, в результате чего происходит замыкание контакта 1 – 2.
Если ламель не смещается, то это означает, что расход воды слишком мал и устройство не может среагировать. Однако на практике это почти полностью исключено, так как значение расхода воды обычно существенно больше установленного минимального значения (например, 6,3 м³/ч при 3″ диаметра трубы). Если известен реальный расход воды, то устройство может быть точно отрегулировано (см. таблицу).
Реле протока в отопительных системах с простым управлением ВКЛ-ВЫКЛ не требуют точной калибровки. Достаточно установить минимальное значение так, что контакт, который управляет горелкой, замкнется, как только будет достигнут установленный расход воды (см. таблицу).
1. Алюминиевая крышка.
2. Микропереключатель (реле).
3. Металлический пружинный cильфон.
4. Алюминиевый корпус.
6. Рычаг из латуни.
7. Пластинка (ламель) из нержавеющей стали.
8. Регулировочный винт.
9. Гайка.
10. Пружина из нержавеющей стали
Монтаж
Для обеспечения безупречной работы реле протока должно устанавливаться на горизонтальном трубопроводе, чтобы пластина (ламель) была вертикальна. Расстояние между трубой и прибором должно составлять не менее 55 мм, а расстояние до последующей арматуры, отводов или фитингов на трубопроводе должно составлять не меньше 5 Ду. Реле протока должно быть ориентировано так, чтобы направление стрелки на корпусе соответствовало направлению протока в трубопроводе. При наличии в теплоносителе посторонних механических включений и высокой загрязненности следует перед реле протока устанавливать фильтр механической очистки.
Схема подключения:
При отсутствии протока контакты 1-2 разомкнуты, а контакты 1-3 замкнуты. По достижении расходом значения, указанного в таблице, контакты 1-2 замыкаются.
В комплект поставки входят:
- реле протока FLU 25 (1 шт)
- пластинки (ламели) различной длины для труб 1” – 8” (4 шт)
- паспорт (1 экз)
Реле протока Watts FLU25PL (FLU 25)
Нет: 137
Да: 321
Полезная статья?На дороге многие могут похвастаться своими навыками вождения, но вот когда судьба ставит нас перед очередными трудностями в виде пробитого колеса, не все смогут справиться с такой проблемой самостоятельно, в их числе и женщины. Но самое главное не спасовать и с достоинством выйти из этого трудного положения победителем. А как — мы вам сейчас расскажем.
Нет: 112
Да: 264
Полезная статья?Реле протока Watts FLU 25 со склада г.Екатеринбург
В комплект поставки реле протока Watts FLU 25 входят пластинки (ламели) различной длины для труб 1” – 8”.
Монтаж реле протока Watts FLU 25:
Для обеспечения безупречной работы реле протока должно устанавливаться на горизонтальном трубопроводе, чтобы пластина (ламель) была вертикальна. Расстояние между трубой и прибором должно составлять не менее 55 мм, а расстояние до последующей арматуры, отводов или фитингов на трубопроводе должно составлять не меньше 5 Ду. Реле протока должно быть ориентировано так, чтобы направление стрелки на корпусе соответствовало направлению протока в трубопроводе. При наличии в теплоносителе посторонних механических включений и высокой загрязненности следует перед реле протока устанавливать фильтр механической очистки.
Технические характеристики реле протока Watts FLU 25:
- Микропереключатель (реле) 6 А – 220 В
- Максимальное рабочее давление 10 бар.
- Максимальная температура теплоносителя 110° С
- Максимальная температура окружающей среды 60° С
- Класс защиты IP 54
- Наружная резьба 1”
Watts Реле протока FLU 25 10022079
Настоящий договор между интернет-магазином OZONAIR.RU и пользователем услуг интернет-магазина, именуемым в дальнейшем «Покупатель» определяет условия приобретения товаров через сайт интернет-магазина https://ozonair.ru
1. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ
1.1. ООО «ГК Озон Групп» публикует настоящий договор купли-продажи, являющийся публичным договором — офертой (предложением) в адрес физических и юридических лиц в соответствии со ст. 435 и пунктом 2 статьи 437 Гражданского Кодекса Российской Федерации (далее — ГК РФ).
1.2. Настоящая публичная оферта (именуемая в дальнейшем «Оферта») определяет все существенные условия договора между ООО «ГК Озон Групп» и лицом, принявшим условия Оферты.
1.3. Настоящий договор заключается между Покупателем и интернет — магазином в момент оформления заказа.
1.4. Оферта может быть (принята) любым физическим или юридическим лицом на территории Российской Федерации, имеющим намерение приобрести товар или услуги, реализуемые и предоставляемые ООО «ГК Озон Групп» через интернет-магазин, расположенный на сайте https://ozonair.ru
1.5. Покупатель безоговорочно принимает все условия, содержащиеся в оферте в целом (т.е. в полном объеме и без исключений).
1.6. В случае принятия условий настоящего договора (т.е. публичной оферты интернет-магазина), физическое или юридическое лицо, производящее акцепт оферты, становится Покупателем. Акцептом является факт оплаты заказа в размере и на условиях настоящего соглашения.
1.7. Оферта, все приложения к ней, а также вся дополнительная информация о товарах/услугах ООО «ГК Озон Групп», опубликована на сайте ozonair.ru
2. СТАТУС ИНТЕРНЕТ — МАГАЗИНА ozonair.ru
2.1. Интернет-магазин является собственностью ООО «ГК Озон Групп» и предназначен для организации дистанционного способа продажи товаров через сеть интернет.
2.2. Интернет-магазин не требует от Покупателя специальных действий для использования ресурса интернет-магазина для просмотра товара, расчета и оформления заказа, таких как регистрация или заключение договора на пользование ресурсом интернет-магазина.
2.3. Интернет-магазин не несет ответственности за содержание и достоверность информации, предоставленной Покупателем при оформлении заказа.
3. СТАТУС ПОКУПАТЕЛЯ
3.1. Покупатель несет ответственность за достоверность предоставленной при оформлении заказа информации и ее чистоту от претензий третьих лиц.
3.2. Покупатель подтверждает свое согласие с условиями, установленными настоящим Договором, путем проставления отметки в графе «Условия Договора мною прочитаны полностью, все условия Договора мне понятны, со всеми условиями Договора я согласен» при оформлении заказа.
3.3. Использование ресурса интернет-магазина для просмотра и выбора товара, а так же для оформления заказа является для Покупателя безвозмездным.
4. ПРЕДМЕТ ОФЕРТЫ
4.1. Продавец, на основании заказов Покупателя и на основании предварительной оплаты, продаёт Покупателю товар в соответствии с условиями и по ценам, установленным Продавцом в оферте и приложениях к ней.
4.2. Доставка товаров, заказанных и оплаченных Покупателем, осуществляется Продавцом или Перевозчиком. Покупатель имеет право забрать товар со склада Продавца самостоятельно (самовывоз). Покупателю при оформлении заказа предоставляется право выбора способа доставки.
4.3. К отношениям между Покупателем и Продавцом применяются положения ГК РФ о розничной купле-продаже (§ 2 глава 30), Закон РФ «О защите прав потребителей» от 07.02.1992 №2300-1, а также иные нормативные правовые акты, принятые в соответствии с ними.
4.4. Физическое или юридическое лицо считается принявшим все условия оферты (акцепт оферты) и приложений к ней в полном объеме и без исключений с момента поступления денежных средств в счет оплаты товара на расчётный счёт Продавца (в случае безналичной оплаты), либо с момента поступления денежных средств в счет оплаты товара на расчетный счет Оператора платежной системы (в случае оплаты через платежные системы), либо внесения денежных средств в кассу Продавца в порядке, предусмотренном Разделом 10 оферты и на условиях, установленных Продавцом в приложениях к оферте. В случае акцепта оферты одним из вышеуказанных способов, физическое лицо считается заключившим с Продавцом договор купли-продажи заказанных товаров и приобретает статус Покупателя.
5. ОПРЕДЕЛЕНИЯ
5.1. Покупатель — физическое или юридическое лицо, принявшее в полном объеме и без исключений условия оферты (совершившее акцепт оферты) в соответствии с п. 4.4. оферты.
5.2. Продавец — ООО «ГК Озон Групп»
5.3. Интернет-магазин — интернет-сайт, имеющий адрес в сети интернет http://ozonair.ru принадлежащий Продавцу и предназначенный для продажи Продавцом Покупателям на основании оферты товаров, принадлежащих Продавцу.
5.4. Сайт — интернет-сайт, имеющий адрес в сети интернет https://ozonair.ru
5.5. Каталог – информация о товарах, размещенная в интернет-магазине.
5.6. Товар – климатическое оборудование, реализуемое Продавцом в интернет-магазине.
5.7. Заказ — решение Покупателя приобрести товар, оформленное в интернет-магазине.
5.8. Место исполнения договора — место (адрес), указанное Покупателем, по которому доставляется товар Покупателю силами Продавца, или склад Продавца, в случае отказа Покупателя от доставки товара силами Продавца, или территория перевозчика, договор с которым заключил Покупатель.
5.9. Представитель – физическое лицо, предъявившее квитанцию или иной документ, свидетельствующий о заключении договора. Представитель юридического лица кроме вышеуказанных документов обязан предъявить доверенность на получение товара и паспорт.
5.10. Перевозчик – юридическое лицо или индивидуальный предприниматель, принявшие на себя по договору перевозки обязанность доставить вверенный ему отправителем товар из пункта отправления в пункт назначения, а также выдать товар получателю. Договор перевозки с перевозчиком заключается Покупателем самостоятельно в случае отказа Покупателя от доставки товара силами Продавца.
5.11. Стороны – совместно Покупатель и Продавец.
6. ПОРЯДОК ЗАКЛЮЧЕНИЯ ДОГОВОРА КУПЛИ-ПРОДАЖИ
6.1. Покупатель может оформить заказ самостоятельно на сайте интернет-магазина, либо через менеджера по телефонам, указанным на сайте, на условиях Договора купли-продажи (публичной оферты интернет-магазина).
6.2. При оформлении заказа в интернет-магазине, Покупатель обязан предоставить о себе информацию:
- Ф.И.О. (для физических лиц) или полное наименование, ИНН (для юридических лиц) Покупателя Товара;
- адрес доставки Товара;
- контактный телефон и электронную почту Покупателя Товара.
6.3. Волеизъявление Покупателя осуществляется посредством внесения последним соответствующих данных в форму заказа в интернет-магазине либо подачей заявки через менеджера интернет-магазина или по e-mail.
6.4. Интернет-магазин не редактирует информацию о Покупателе.
6.5. Для получения бумажного экземпляра Договора купли-продажи, Покупатель отправляет заявку по электронной почте или телефону, указанным на сайте.
7. ИНФОРМАЦИЯ О ТОВАРЕ
7.1. Товар представлен на сайте через фото-образцы, являющиеся собственностью интернет-магазина.
7.2. Каждый фото-образец сопровождается текстовой информацией: наименованием, размерным рядом, ценой и описанием товара.
7.3. Все информационные материалы, представленные в интернет — магазине, носят справочный характер и не могут в полной мере передавать информацию о свойствах и характеристиках товара, включая цвета, размеры и формы. В случае возникновения у Покупателя вопросов, касающихся свойств и характеристик товара, Покупатель должен, перед оформлением заказа, обратиться к Продавцу по телефонам указанным на сайте.
7.4. По просьбе Покупателя менеджер интернет-магазина обязан предоставить (по телефону или посредством электронной почты) прочую информацию, необходимую и достаточную, с точки зрения Покупателя, для принятия им решения о покупке товара.
7.5. Покупатель уведомлен о том, что приобретая товар со скидкой, установленной в связи с его недостатками (дефектами), он лишается права ссылаться на них в дальнейшем.
7.6. Покупатель уведомлен Продавцом о том, что товар, указанный в счете отдельными позициями в любом случае не является комплектом.
8. ПОРЯДОК ПРИОБРЕТЕНИЯ ТОВАРА
8.1. Покупатель вправе оформить заказ на любой товар, представленный в интернет-магазине. Каждый товар может быть заказан в любом количестве. Исключения из указанного правила указаны в описании каждого товара в случае проведения акций, снятия товара с продажи и т.п.
8.2. Заказ может быть оформлен Покупателем по телефонам, указанным на сайте или оформлен самостоятельно на сайте. Подробности оформления заказа через сайт описаны в разделе «Как сделать заказ».
8.3. После оформления заказа Продавец на e-mail Покупателя отправляется подтверждение принятия заказа и счет, с указанием наименования, размера, цены выбранного товара и общей суммы заказа, являющийся неотъемлемой частью настоящего договора. Оплата счета (полностью или частично) Покупателем является подтверждением Покупателя правильного оформления заказа. Далее менеджер интернет-магазина связывается с Покупателем (по телефону или посредством электронной почты) для получения подтверждения заказа.
8.4. При отсутствии товара на складе менеджер интернет-магазина обязан поставить в известность об этом Покупателя (по телефону или посредством электронной почты).
8.5. Покупатель вправе сделать предварительный заказ на временно отсутствующий на складе товар.
8.6. При отсутствии товара Покупатель вправе заменить его другим товаром либо аннулировать заказ.
8.7. Заказ обрабатывается только после внесения предоплаты.
8.8. Срок поставки товара указывается в счете и исчисляется в рабочих днях, начиная с момента зачисления денежных средств (авансового платежа) на расчетный счет Продавца.
9. ЦЕНА ТОВАРА
9.1. Цена товара в интернет-магазине указана в рублях РФ за единицу товара.
9.2. Указанная на сайте цена товара может быть изменена интернет-магазином в одностороннем порядке, при этом цена на заказанный и оплаченный Покупателем товар изменению не подлежит.
9.3. Полная стоимость заказа состоит из каталожной стоимости товара, стоимости доставки и стоимости подъёма на этаж.
9.4. Стоимость услуг, предоставляемых Покупателю Продавцом при покупке товара в интернет-магазине указана в разделе «Оплата и Доставка».
10. ОПЛАТА ТОВАРА
10.1. Способы и порядок оплаты товара указаны на сайте в разделе «Оплата и Доставка». При необходимости порядок и условия оплаты заказанного товара оговариваются Покупателем с менеджером интернет-магазина.
10.2. При наличной форме оплаты Покупатель обязан уплатить Продавцу цену товара в момент его передачи путем передачи денег представителю интернет-магазина, который доставит товар.
10.3. Оплата безналичным расчетом производится согласно оформленному счёту в течение трёх банковских дней. После поступления денежных средств на счет Продавца, менеджер интернет-магазина согласовывает с Покупателем срок доставки. При безналичной форме оплаты обязанность Покупателя по уплате цены товара считается исполненной с момента зачисления соответствующих денежных средств на расчетный счет, указанный Продавцом.
10.4. Покупатель оплачивает заказ любым способом, выбранным в интернет-магазине.
10.5. Расчеты Сторон при оплате заказа осуществляются в российских рублях.
11. ДОСТАВКА ТОВАРОВ
11.1. Способы, порядок и сроки доставки товара указаны на сайте в разделе «Оплата и Доставка». Порядок и условия доставки заказанного товара оговариваются Покупателем с менеджером Интернет-магазина.
11.2. Самовывоз товара:
11.2.1. Продавец, получив уведомление о размещенном заказе, подтверждает его получение по телефону или по e-mail Покупателя и согласовывает с ним дату самовывоза товара.
11.2.2. Покупатель оплачивает (при наличной форме оплаты) и получает заказ по месту нахождения склада Продавца. Адреса и режим работы склада указанны на сайте Продавца в разделе «Сервисы». При безналичной форме оплаты Продавец дополнительно по телефону или по e-mail Покупателя подтверждает факт зачисления оплаты заказа на расчетный счет Продавца и только после этого согласовывает с Покупателем дату самовывоза товара.
11.2.3. Право собственности и риск случайной гибели, утраты или повреждения товара переходит к Покупателю с момента передачи товара Покупателю или его Представителю.
11.3. Доставка товара Продавцом:
11.3.1. Переход права собственности, риск утраты или повреждения товара переходит к Покупателю с момента передачи товара Покупателю или Представителю в месте исполнения договора с момента подписания Сторонами акта приёма товара (товарной накладной.)
11.3.2. При доставке товар вручается Покупателю или Представителю.
11.4. Доставка товара Перевозчиком:
11.4.1. Право собственности, риск случайноого повреждения, утраты или повреждения товара переходит с Продавца на Покупателя или Перевозчика (в соответствии с заключенным между Покупателем и Перевозчиком договором) с момента передачи товара перевозчику в месте исполнения договора при подписании Сторонами акта приёма товара (товарной накладной и/или транспортной накладной и/или товарно-транспортной накладной).
11.4. Обязательство по передачи товара Покупателю, в том числе п. 11.4.1., считается исполненным с момента передачи товара Перевозчику.
11.4.3. Стоимость доставки товара в рамках каждого заказа рассчитывается исходя из веса всех заказанных товаров, адреса доставки заказа, расценок перевозчика и оплачивается Покупателем самостоятельно.
11.5. Покупатель обязан принять товар по количеству и ассортименту в момент его приемки.
11.6. При получении товара Покупатель должен в присутствии представителя Продавца (перевозчика) проверить его соответствие товарной накладной, удостовериться по наименованию товара в количестве, качестве, комплектности товара.
11.7. Покупатель или Представитель при приемке товара подтверждает своей подписью в товарной накладной, что не имеет претензий к внешнему виду и комплектности товара.
12. ВОЗВРАТ ТОВАРА
12.1. Покупатель вправе отказаться от товара в любое время до его передачи, а после передачи товара — в течение семи дней.
12.2. Возврат товара надлежащего качества возможен в случае, если сохранены его товарный вид, потребительские свойства, а также документ, подтверждающий факт и условия покупки указанного товара.
12.3. Покупатель не вправе отказаться от товара надлежащего качества, имеющего индивидуально-определенные свойства, если указанный товар может быть использован исключительно приобретающим его Покупателем (в т.ч. не стандартные (по желанию Покупателя) размеры и др.). Подтверждением того, что вещь имеет индивидуально-определенные свойства, является отличие размеров товара размерам, указанным в интернет-магазине.
12.4. Возврат товара, в случаях, предусмотренных законом и настоящим Договором, производится по адресам, указанным на сайте в разделе «Обмен и возврат товара».
12.5. При отказе Покупателя от товара надлежащего качества Продавец возвращает ему сумму, уплаченную в соответствии с договором, за исключением расходов Продавца на доставку от Покупателя возвращенного товара, не позднее чем через 10 дней, с даты предъявления Покупателем соответствующего требования.
12.6. В случае, если возврат суммы осуществляется не одновременно с возвратом товара, возврат указанной суммы осуществляется Продавцом наличными денежными средствами по месту нахождения Продавца, или путем перечисления на банковский счет Покупателя с которого была осуществлена оплата товара или иной счет сообщенный Покупателем.
12.7. Указанный в настоящем пункте способ возврата денежных средств может использоваться Продавцом и в иных случаях возврата денежных средств, предусмотренных настоящим договором и законодательством РФ.
13. ОТВЕТСТВЕННОСТЬ СТОРОН
13.1. Стороны несут ответственность в соответствии с законодательством РФ.
13.2. Продавец не несет ответственности за ущерб, причиненный Покупателю вследствие ненадлежащего использования им товаров, заказанных в интернет-магазине.
13.3. Стороны освобождаются от ответственности за неисполнение или ненадлежащее исполнение обязательств по договору на время действия непреодолимой силы.
14. ПРОЧИЕ УСЛОВИЯ
14.1. К отношениям между Покупателем и Продавцом применяется законодательство Российской Федерации.
14.2. При необходимости Продавец и Покупатель вправе в любое время оформить договор купли-продажи товара в форме письменного двухстороннего соглашения, не противоречащего положениям настоящей оферты.
14.3. В случае возникновения вопросов и претензий со стороны Покупателя, он должен обратиться в Центр обслуживания клиентов по телефону: 8(495) 999-16-92 или по e-mail: [email protected]
14.4. Настоящий договор вступает в силу с даты акцепта Покупателем настоящей оферты и действует до полного исполнения обязательств Сторонами.
14.5. Все споры и разногласия, возникающие при исполнении Сторонами обязательств по настоящему договору, решаются путем переговоров. В случае невозможности их устранения, Стороны имеют право обратиться за судебной защитой своих интересов.
14.6. Интернет-магазин оставляет за собой право расширять и сокращать товарное предложение на сайте, регулировать доступ к покупке любых товаров, а также приостанавливать или прекращать продажу любых товаров по своему собственному усмотрению.
15. ГАРАНТИИ НА ТОВАР
15.2. Гарантийный срок вступает в силу с момента подписания Акта приема-передачи Товара Покупателем или Представителем.
15.3. Претензии относительно скрытых недостатков Товара от Покупателя принимаются Продавцом в пределах гарантийного срока с обязательным приложением Покупателем настоящего Договора, приложения к Договору, Акта приема-передачи Товара (ТН, ТТН).
15.4. По дефектам, появившимся из-за неправильной эксплуатации Покупателем Товара, а также по дефектам, возникшим при сборке (монтаже) и доставке Товара, произведенной не работниками Продавца, претензии не принимаются.
16. АДРЕС И РЕКВИЗИТЫ ПРОДАВЦА
| Наименование предприятия: | ООО «ГК Озон Групп» |
| Дата регистрации | 11 апреля 2016г.. |
| ОГРН | 1167746362717 |
| ОКПО | 01862608 |
| ОКВЭД | 52.61, 52.72, 45.34, 45.31, 74.20, 51.70, 51.54, 51.47, 52.46, 52.48 |
| Юридический адрес: | 117292, г. Москва, Дмитрия Ульянова, д.6, корп. 1, этаж 1, пом. 3П |
| Тел./факс | (495) 999-16-92 |
| ИНН/КПП | 7728336506\772801001 |
| Р/счет | 40702810202540000651 |
| Банк: | АО «АЛЬФА-БАНК» г.Москва |
| Корр./счет | 30101810200000000593 |
| БИК | 044525593 |
Реле протока WATTS, с регулировкой скорости срабатывания FLU 25 [ арт 10022079 ] давление срабатывания 10 бар
Реле протока WATTS FLU25 используется для контроля наличия протока воды в автономной отопительной системе с принудительной циркуляцией, вплоть до минимальных значений расхода
Описание:
Реле протока используется для контроля протока воды. Монтируется горизонтально. Для труб 1″ — 8″. Рабочая температура до 110 градусов С. Рабочее давление до 10 бар. Реле протока предустановлено на минимальное значение расхода. Переключатель 220В — 6А — 50Гц.
Реле протока FLU 25 используется для контроля наличия протока воды в автономной отопительной системе с принудительной циркуляцией, вплоть до минимальных значений расхода. В зависимости от схемы подключения реле протока может включать либо выключать соответствующий элемент автономной отопительной системы при исчезновении либо появлении протока теплоносителя. Например, при отключении циркуляционного насоса может быть отключена горелка. Реле протока может также использоваться для защиты циркуляционного насоса от сухого хода. Реле протока имеет металлический корпус и может устанавливаться в помещениях с высокой влажностью. Наличие пружинного сильфона (сильфонного уплотнения) делает реле протока также пригодным для дизельного топлива. В комплект поставки входят пластинки (ламели) различной длины для труб 1” – 8”.
Монтаж:
Для обеспечения безупречной работы реле протока должно устанавливаться на горизонтальном трубопроводе, чтобы пластина (ламель) была вертикальна. Расстояние между трубой и прибором должно составлять не менее 55 мм, а расстояние до последующей арматуры, отводов или фитингов на трубопроводе должно составлять не меньше 5 Ду. Реле протока должно быть ориентировано так, чтобы направление стрелки на корпусе соответствовало направлению протока в трубопроводе. При наличии в теплоносителе посторонних механических включений и высокой загрязненности следует перед реле протока устанавливать фильтр механической очистки.
1. Алюминиевая крышка. 2. Микропереключатель (реле). 3. Металлический пружинный сильфон. 4. Алюминиевый корпус. 5. Резьбовой штуцер 1” из латуни. 6. Рычаг из латуни. 7. Пластинка (ламель) из нержавеющей стали. 8. Регулировочный винт. 9. Гайка. 10. Пружина из нержавеющей стали
Технические характеристики:
Микропереключатель (реле) 6 А – 220 В.
Максимальное рабочее давление 10 бар.
Максимальная температура теплоносителя 110° С.
Максимальная температура окружающей среды 60° С.
Класс защиты IP 54
Наружная резьба 1”
FLU Riels® Instruments — Riels Instruments — Каталоги в формате PDF | Техническая документация
ЛОПАТНЫЕ ПЕРЕКЛЮЧАТЕЛИ ПОТОКА РЕГУЛЯТОРЫ ПОТОКА Магнитные лопастные переключатели потока Магнитные реле потока Riels — наиболее часто используемые устройства в большинстве промышленных приложений для включения / выключения управления потоком газа и жидкости. Чтобы получить исполнения, отвечающие основным требованиям к окружающей среде и безопасности, лопастные реле потока могут быть построены в вариантах с электрическими контактами микропереключателя SPDT или DPDT, и на них можно установить различные модели для коммерческого учета, которые включают дополнительную версию с двухцветным визуальным индикатором потока.Доступные версии Flu A для контроля потока газа Flu O для проверки потока жидкостей Все данные и содержание этого листа являются исключительной собственностью Riels Instruments Applications — Защита насосов, двигателей и другого оборудования от неблагоприятных воздействий, вызванных низким или низким отсутствие нагрузки. — Проверка работоспособности последовательно установленных насосов. — Автоматическое включение насосов и / или вспомогательных двигателей. — Прекращение работы двигателей, систем и технологических систем, работающих с жидкостным охлаждением, в случае блокировки потока охлаждающей жидкости.- Блок горелки на возникновение неисправности в прохождении воздушного потока через нагревательный змеевик. Примерная реализация / Отсутствие расхода для холодной воды (м3 / ч) Модель Flu O с двухцветным визуальным индикатором потока и водонепроницаемым корпусом Примерное выполнение / Отсутствие скорости для холодной воды (м3 / ч) Доступные модели Два колеблющихся магнита, размещенные на одном и том же оси (первая встроена в лопасть, а вторая встроена в электрическое оборудование) отталкиваются друг от друга через фланец из немагнитного материала.Фланец отделяет корпус, в котором находится электрическое оборудование, от лопасти, вставленной в трубу. В отсутствие потока лопасть удерживается в исходном положении за счет уравновешивания и отталкивания двух магнитов, расположенных напротив друг друга и имеющих одинаковую полярность. Когда поток толкает лопасть, встроенный в нее магнит приводится в движение, и магнитное поле толкает встроенный намагниченный переключатель. Переключение электрического контакта происходит быстро и надежно. Монтаж Реле потока Riels FLU можно устанавливать горизонтально, непосредственно в трубопроводе или в определенном помещении, соединенном между двумя трубами.Для этого доступны различные типы переходных фланцев агрегата в соответствии с требованиями конкретных приложений. Для управления потоком газа, с алюминиевым корпусом IP67. Для управления потоком жидкостей, с алюминиевым корпусом IP67 и двухцветным визуальным индикатором потока (по запросу). Контактные детали ФЛАНЕЦ Сталь
Крыльчатые реле потока Colima серии FLU
Данные tecnici forniti non sono impegnativi per il costruttore che si riserva la facoltà di modificarli senza obbligo di preavviso.© Copyright 2012 7A.330-E Выпуск 2 — 2012 Colima FLU Series Vane Flow Переключатели Описание Реле потока с магнитным приводом для контроля расхода газа или жидкости используются в большинстве промышленных приложений. Реле потока могут быть оснащены электрическими контактами, микровыключателями SPDT или DPDT, а также различными защитными кожухами и опциональным двухцветным визуальным индикатором для соответствия большинству условий окружающей среды и безопасности.Версии Flu A — это версия для обнаружения потока газа, а Flu O предназначена для приложений, связанных с потоком жидкости. Области применения — Защита насосов, двигателей и другого оборудования от низкого расхода или его отсутствия — Контроль последовательной работы насосов — Автоматический запуск вспомогательных насосов и двигателей — Остановка двигателей, машин и технологических процессов с жидкостным охлаждением, когда поток охлаждающей жидкости прерывается — Выключает горелку при отказе потока воздуха через нагревательный змеевик DN Приблизительный расход срабатывания / выключения Расход для холодной воды (м 3 / ч) Приблизительный срабатывание / скорость отключения для холодной воды (м / с) 50 4/2 , 8 0,57 / 0,40 65 4,2 / 2,9 0,35 / 0,24 80 4,3 / 3 0,24 / 0,17 100 4,5 / 3,2 0,16 / 0 , 11 125 7 / 4,9 0,16 / 0,11 150 7,8 / 5,5 0,12 / 0,09 Тип гриппа O с двухцветным визуальным индикатором и погодозащищенным корпусом Доступные типы FLU A FLU O Реле потока газа в алюминиевом корпусе IP 67.Реле потока жидкости с алюминиевым корпусом IP 67 и двухцветным визуальным индикатором (опция). O Принцип работы Два колеблющихся магнита на одной оси, один заодно с лопаткой, а другой заодно с электрооборудованием, взаимно отталкиваются друг от друга через фланец из немагнитного материала. Фланец отделяет корпус с электрооборудованием от лопатки, вставленной в трубу. Лопатка в отсутствие потока удерживается в исходном положении за счет противовеса и отталкивания двух магнитов, обращенных друг к другу с одинаковой полярностью.Когда поток толкает лопасть, встроенный магнит лопасти движется, и магнитное поле толкает встроенный магнит переключателя. Переключение электрического контакта происходит быстро и надежно. Монтаж Реле потока Flu можно устанавливать горизонтально, непосредственно в трубу или в специальной камере, соединенной между двумя трубами. По запросу заказчика доступны несколько типов фланцев. Страница 1 di 4
FRP: проточная платформа, микрожидкостный датчик потока
Работа с несколькими жидкостями
Переключение между несколькими жидкостями может оставлять временные отложения в виде жидких слоев внутри стеклянного капилляра.Это особенно характерно для нерастворимых жидкостей, но может происходить даже с смешивающимися жидкостями. Например, когда IPA сопровождается водой в датчике без промежуточной сушки, большие смещения могут наблюдаться в течение нескольких часов после переключения на воду.
Если возможно, выделите отдельный датчик для каждой измеряемой жидкости. Если это невозможно, будьте осторожны при смене носителя и тщательно очистите.
Работа с водой
При работе с водой рекомендуется , а не , чтобы датчик просох.Все соли и минералы, содержащиеся в воде, откладываются на стекле, и их трудно удалить. Хотя солевые растворы особенно подвержены проблемам, даже чистая вода может содержать достаточно растворенных минералов, чтобы образовать слой отложений. Регулярно промывайте деионизированной водой, чтобы предотвратить образование отложений. Если проблемы по-прежнему возникают, время от времени промывайте датчик слабокислыми чистящими средствами.
При работе с водой, содержащей органические вещества (сахар и т. Д.), Микроорганизмы часто растут на стенках стеклянного капилляра и образуют органическую пленку, которую трудно удалить.Регулярно промывайте такими растворителями, как этанол, метанол или IPA, или моющими средствами для удаления органических пленок.
Работа с силиконовыми маслами
При работе с силиконовым маслом рекомендуется , а не , чтобы датчик просох. Силиконовые масла можно очистить с помощью специальных очистителей. Уточняйте у поставщика силиконового масла чистящие средства, совместимые со стеклянными поверхностями.
Работа с красками или клеем
При работе с красками или клеем очень важно, чтобы датчик , а не , просох.Часто отложения красок и клея уже невозможно удалить после их высыхания. Промойте датчик чистящими средствами, рекомендованными производителем краски или клея, совместимыми со стеклом. Перед выполнением первых тестов убедитесь, что вы нашли правильную процедуру очистки, и всегда выполняйте очистку вскоре после опорожнения датчика.
Работа со спиртами или растворителями
В отличие от большинства других жидкостей, спирты и растворители не критичны, и для очистки стенок капилляров достаточно короткой промывки изопропанолом (IPA).
Прочие жидкости или приложения
Если вы не уверены в своей области применения и в том, как очистить датчик потока, свяжитесь с FLUIGENT для получения дополнительной поддержки по адресу [email protected]
Идентифицированные чистящие растворы
| Образец жидкости | Чистящий раствор | Поставщик |
| Биопленка / клетки | · Средство для удаления биопленок · Дихлоризоцианурат натрия (1 ppm HClO; ref: 218928) | · Умвельтаналитик · Сигма Олдрич |
| 1% микрошарики полистирола в деионизированной воде | · Толуол 99.8% (ссылка: 244511) | · Сигма Олдрич |
| Минеральное масло (каталожный номер Sigma 5904) | · RBS 25 (Ссылка: 83460) · Tergazyme | · Sigma Aldrich · ALCONOX |
| Кровь | · BD FACS Clean · RBS 25 (ссылка: 83460) · Tergazyme | · BD · Сигма Олдрич · АЛКОНОКС |
| Ткани, биологические жидкости, белковая почва (биологическое применение) | · Tergazyme | · ALCONOX |
| Растворитель и остатки биореактора | · Tergazyme | · ALCONOX |
КАК ПОЛЬЗОВАТЬСЯ TERGAZYME?
- Сделайте свежий 1% раствор (10 грамм на литр) в холодной или теплой воде.Если возможно, используйте теплую воду при температуре ниже 130F (55 ° C). Для сложных почв используйте очень горячую воду (выше 150F или 65 ° C) и используйте вдвое больше рекомендованного количества моющего средства.
- Ci Медленно обрабатывайте раствор в течение не менее 1/2 часа.
- ТЩАТЕЛЬНО ПРОМЫТЬ — желательно проточной водой.
- Сушка может повлиять на остатки и коррозию. При испарении могут откладываться загрязнения из промывочной воды. Чтобы свести к минимуму это, Dry с использованием методов , которые физически удаляют промывочную воду с субстрата, например, изопропиловый спирт, заключительное ополаскивание.
| Форма | Порошок |
| Разбавление (%) | 1 |
| Мин. Температура стирки | Окружающий |
| Обычная температура стирки | Макс 130F или 55 ° C |
| Перчатки защитные | Желаемое |
| Защита глаз | Желаемое |
НЕРЕКОМЕНДУЕМЫЕ МЕТОДЫ ОЧИСТКИ
В целом, следует избегать любой механической очистки .Никогда не входите в проточный тракт датчика с острыми предметами, которые могут поцарапать поверхность стекла.
Кроме того, нельзя использовать абразивные материалы или жидкости, содержащие твердые частицы, которые могут полностью отшлифовать поверхность. Все, что затрагивает стеклянную стену, вызовет отклонения в характеристиках измерения или необратимо повредит датчик.
Сильные кислоты и щелочи также не следует использовать для очистки сенсора . Иногда можно использовать кислоты в низких концентрациях и при низких температурах.Перед использованием кислоты проверьте, насколько она совместима с боросиликатным стеклом 3.3 (Pyrex® или Duran®).
Вернуться к часто задаваемым вопросам
Получить ценовое предложение, запрос цен, цену или купить
Турбинный датчик потока Tri-Clamp из нержавеющей стали имеет возможность измерения низкого расхода в широком диапазоне применений, подходящих для нейтральных, коррозионных, водных и непрозрачных жидкостей, включая топливо. Превосходная производительность в условиях высокого давления. Сверхлегкий ротор турбины очень точно отслеживает колебания потока и генерирует цифровой выходной сигнал высокого разрешения, отраженный в ИК-диапазоне.Датчик потока из нержавеющей стали Tri-Clamp Turbine может измерять расход и суммировать его как в приложениях с контролем потока, так и в приложениях для мониторинга.
Превосходная производительность для санитарных применений в пищевой, химической промышленности и т. Д.
Характеристики:
- Турбинный датчик расхода Tri-Clamp из нержавеющей стали с выходным сигналом высокого разрешения
- Измерение расхода с революционным инфракрасным отражением ротора турбины
- Нержавеющая сталь SS 316L — PFA для высокой коррозионной стойкости
- Превосходная производительность при высоком рабочем давлении
- Высокая точность и повторяемость
- Также подходит для непрозрачных жидкостей
- Все материалы с высокой химической стойкостью
Все части, контактирующие со средой, изготовлены из нержавеющей стали.316L / PFA с рубиновым подшипником и уплотнением из FPM (Viton ® ).
| ТИП | 0045 | 0085 | 0125 |
|---|---|---|---|
| Внутренний диаметр в мм | 4,5 | 8,5 | 12,5 |
| Диапазон расхода | 0,1 — 2 л / мин | 0.5-20 л / мин | 1,5 — 40 л / мин |
| Точность | 1% чтения | 1% чтения | 1% чтения |
| Повторяемость | <0,15% | <0,15% | <0,15% |
| Смачиваемые материалы | SS316L / PFA / Рубин | SS316L / PFA / Рубин | SS316L / PFA / Рубин |
| Уплотнительное кольцо | Viton или EFDM | Viton или EFDM | Viton или EFDM |
| Подключения | 3/4 дюйма Tri-Clamp | 3/4 дюйма Tri-Clamp | 1 » Tri-Clamp |
| Размеры, вкл.корпус в мм | л макс 68 | л макс 68 | л макс.69 |
| Температура жидкости, ° C | -20 до +80 | -20 до +80 | -20 до +80 |
| Макс. давление при 20 ° C | 10 (100 бар) | 10 (100 бар) | 10 (100 бар) |
| Вязкость в сСт. | 0,8 — 10 | 0,8 — 10 | 0,8 — 10 |
| Прил. К-фактор (вода) / л | 110,000 | 5,500 | 2 000 |
| Блок питания | 5-30 В постоянного тока | 5-30 В постоянного тока | 5-30 В постоянного тока |
| Выходной сигнал | прямоугольная волна 5-30 В | прямоугольная волна 5-30 В | прямоугольная волна 5-30 В |
| Потребляемая мощность | 34 мА при 5 В | 34 мА в 5 В | 34 мА в 5 В |
| Длина электрического кабеля | 1 метр | 1 метр | 1 метр |
Типичные области применения:
- Биотехнологии и фармацевтика
- Чистые помещения и полупроводники
- Измерение уровня топлива
- OEM и настройка
- Устройство управления перистальтическим насосом
- Очистка воды и дезинфекция
ПРИНАДЛЕЖНОСТИ — Fluimac
КОМПЛЕКТ РЕГУЛИРОВКИ ВОЗДУХА
Отрегулируйте и установите давление и расход воздуха с помощью фильтра-регулятора, манометра и воздушного клапана.
ПЕРЕКЛЮЧАТЕЛЬНЫЕ КЛАПАНЫ
Удаленный запуск и остановка с электромагнитным или пневматическим клапаном для воздухопровода насоса.
СЧЕТЧИК ХОДА
Подсчитайте количество штрихов, связанных с контролем. Это позволяет осуществлять различные типы мониторинга.
ЖИДКОСТЬ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НЕИСПРАВНОСТЕЙ ДИАФРАГМЫ
Детектор утечки выдает сигнал, и насос может быть отключен при выходе из строя диафрагмы.
ПНЕВМАТИЧЕСКИЙ КОНТРОЛЬ ПАРТИИ
Пневматический дозаторможет управлять любым насосом FLUIMAC AODD, позволяя установить количество циклов.
ЭЛЕКТРОННОЕ УПРАВЛЕНИЕ ПАРТИЕЙ
Электронный дозаторможет управлять любым насосом FLUIMAC AODD, позволяя установить количество циклов.
ФИЛЬТРЫ КОРЗИННОГО ФИЛЬТРА ИЗ ПП
Устанавливается на всасывании насосов, защищает их от взвешенных твердых частиц и примесей.
GEMINI CONTROL
Электронная система управления ТОЧНЫМИ насосами. Эта система позволяет использовать насос AODD в качестве системы дозирования.
БУСТЕР ДАВЛЕНИЯ
Если давления в линии недостаточно, эта система удваивает входное давление для правильной подачи воздуха в насос.
ТЕЛЕЖКА INOX
Изготавливает мобильные насосы.
КОМПЛЕКТ АНТИВИБРАЦИОННЫХ НОЖЕК
Уменьшает физическое вибрация от работы насоса AODD.
PP, PVDF, ALU, СОЕДИНЕНИЕ SS
Диспенсер в доставку контроль и дозирование.
ШЛАНГ ПВХ АРМИРОВАННЫЙ
С металлической арматурой для всасывания / нагнетания, также для пищевых продуктов.
КЛАПАН ШАРОВОЙ НОЖНОЙ
Изготовлен из полипропилена и ПВДФ. Доступный размер 1 дюйм — 1 дюйм 1/4 — 1 дюйм 1/2 — 2 дюйма.Используется для предотвращения опорожнения всасывающего шланга.МЯГКИЙ СТАРТЕР
Насос AODD всегда рекомендуется запускать медленно. Это для защиты диафрагм.
КЛАПАНЫ, ФИТИНГИ И СОЕДИНЕНИЯ ИЗ ПП, ПВХ, INOX
КОМПЛЕКТ ФЛАНЦЕВЫХ СОЕДИНЕНИЙ
Адаптация насоса от BSP тип соединения с фланцами с этим комплектом.
КРОНШТЕЙН НАСТЕННЫЙ
Настенный кронштейн для мембранных насосов всех размеров.Новый поток гриппа.Пандемия все еще бушует во многих… | Эрик Сабер | Startup
После повторного просмотра этого потока в целом стало ясно, что есть некоторые избыточности и что консолидация может улучшить UX в целом.
Текущий поток выглядит следующим образом:
1. Выберите возраст (из раскрывающегося списка) и введите местоположение (почтовый индекс). Щелкните Продолжить.
2. Выберите местоположение Walgreens. Щелкните Продолжить.
3. Выберите тип вакцины для назначения. Щелкните Продолжить.
4.Выберите дату и время. Щелкните Продолжить.
5. Введите личную информацию. Щелкните Продолжить.
6. Перед отправкой ознакомьтесь с информацией о встрече.
В идеале, если я хочу записаться на прием, я бы хотел сделать следующее:
1. Введите местоположение, найдите мое предпочтительное местоположение Walgreens. Щелкните Продолжить.
2. Выберите дату и время, когда я приду. Нажмите «Продолжить».
3. Заполните мою основную информацию. Щелкните Продолжить.
4. Просмотрите детали встречи перед отправкой.
В настоящее время на первом экране Walgreens требует, чтобы вы вводили свой возраст через раскрывающийся список (поскольку они не будут назначать укол никому младше 3 лет), а затем они требуют, чтобы вы вводили эту информацию еще раз один раз вы попадете на экран личной информации на странице 5. Я полностью исключил это поле первого возраста, так как его можно проверить на достоверность на экране личной информации. Затем на том же первом экране они запрашивают ваш почтовый индекс, но вы должны нажать кнопку «Продолжить», прежде чем сможете увидеть или выбрать предпочтительное место на странице 2.Это кажется ненужным, так как его можно загрузить непосредственно под полем почтового индекса (на том же первом экране), как только местоположение будет введено. Итак, я объединил эти первые два экрана.
Я также полностью исключил страницу «Тип вакцины». Я сделал это, потому что кнопка CTA на главной странице специально упоминает о планировании прививки от гриппа, так почему бы не предложить пользователю заказать прививку от гриппа только ? Я полагаю, что не может быть так сложно включить специальный модуль для прививок от гриппа, который включается каждый сезон гриппа.Не заставляйте пользователей больше думать — они уже думали, что записываются на прием только для того, чтобы сделать прививку от гриппа.
Однако все остальное выглядело довольно хорошо — мне нужно было только обновить индикатор «Шаг X из Y» внизу каждой страницы, чтобы отразить более простой процесс. Вот взгляд на мою новую концепцию пользовательского потока:
Регулирование активности РНК-полимеразы гриппа и переключение между репликацией и транскрипцией с помощью концентраций 5′-конца вРНК, источника кэпа и полимеразы
Резюме
Грипп РНК-зависимая РНК-полимераза (RdRp) одновременно реплицирует геном РНК гриппа и транскрибирует его мРНК.Репликация происходит de novo ; однако для инициации транскрипции требуется праймер с кэпом 7-метилгуанозина, который «отрывается» от мРНК хозяина с помощью эндонуклеаз и кэп-связывающих функций полимеразы гриппа. Ключевой вопрос — как вирус регулирует относительное количество транскрипции и репликации. Мы обнаружили, что концентрация кэпированной клеточной мРНК, концентрация 5’-конца вирусной РНК и концентрация RdRp регулируют относительные количества репликации по сравнению с транскрипцией.МРНК хозяина, от которой RdRp отрывает свой кэпированный праймер, действует, повышая регуляцию транскрипции и репрессируя репликацию. Повышенные концентрации самого RdRp переключают полимеразу гриппа в сторону репликации, вероятно, за счет олигомеризации полимеразы. 5’-конец матрицы вРНК как активирует репликацию, так и ингибирует транскрипцию матрицы вРНК, тем самым указывая на то, что RdRp содержит аллостерический сайт связывания для 5 ’конца матрицы вРНК. Эти данные дают представление о регуляции RdRp на протяжении жизненного цикла вируса и о том, как он синтезирует соответствующие количества вирусной мРНК и продуктов репликации (вРНК и кРНК).
Грипп кодирует комплекс гетеротримерной РНК-зависимой РНК-полимеразы (RdRp 1 ), который как реплицирует геном РНК гриппа, так и транскрибирует его мРНК. Гетеротримерный комплекс состоит из трех субъединиц: PA, PB1 и PB2. Субъединица PA, вероятно, отвечает за эндонуклеазную активность полимеразы (1, 2). Активный сайт полимеразы, скорее всего, находится в субъединице PB1, в то время как PB2 содержит сайт связывания 7-метилгуанозин-5 ’кэп (3-7).
Репликация происходит de novo и начинается с вРНК, действующей в качестве матрицы для производства промежуточного звена кРНК, которое, в свою очередь, становится матрицей для производства большего количества цепей вРНК (вРНК → кРНК → вРНК) (8-10).В своей транскрипционной способности полимераза также использует вРНК в качестве матрицы (вРНК → мРНК). Однако вирус гриппа не может продуцировать собственный 5’-кэп 7-метилгуанозина и, следовательно, для транскрипции ему требуется кэпированный праймер. Чтобы решить эту проблему, полимераза гриппа содержит функции связывания кэпа и эндонуклеазы, которые позволяют ей отщеплять кэпированные праймеры от мРНК хозяина (7, 11). Расщепление происходит от 9-17 нуклеотидов от 5 ’конца мРНК хозяина, обычно после пурина. После расщепления полимераза начинает синтезировать свою собственную мРНК на 3’-конце украденного, кэпированного праймера.Когда полимераза встречается с олиго-U-трактом около 5 ’конца матрицы вРНК, она многократно заикается по последовательности, тем самым производя мРНК, содержащую 3’ полиаденилированный хвост (12-14). Полимераза, следовательно, выполняет две совершенно разные функции и, по-видимому, должна регулировать частоту, с которой она генерирует мРНК по сравнению с продуктами репликации. Однако механизм, с помощью которого полимераза переключается между этими видами активности, еще полностью не определен.
Предыдущие исследования показали, что на ранних стадиях инфекции вирусная мРНК может быть легко обнаружена, в то время как кРНК может быть обнаружена очень мало или вообще не может быть обнаружена (15-18).На более поздних стадиях заражения наблюдаются как кРНК, так и мРНК, а также увеличивающееся количество вРНК. Это говорит о том, что на ранних стадиях заражения полимераза действует в основном в режиме транскрипции, а на более поздних стадиях она переключается в режим репликации. Одна модель переключения предполагает, что на ранней стадии инфицирования продуцируются и мРНК, и кРНК, но незащищенная кРНК подвергается воздействию нуклеаз хозяина и разрушается, в то время как кэпированная и полиаденилированная мРНК защищена (19, 20). На более поздних стадиях инфекции продуцируются значительные количества возникающих RdRp и нуклеопротеинов (NP), которые стабилизируют и защищают кРНК от деградации.Также было высказано предположение, что неструктурный белок 2 гриппа (NS2) играет более прямую роль в переключении полимеразы с транскрипции на репликацию, вероятно, через взаимодействие с полимеразным комплексом (18).
В этом исследовании мы показываем, что концентрация RdRp, вирусной матрицы и источника кэп-хозяина может регулировать переключение полимеразы между транскрипцией и репликацией. In vitro. Анализы восстановления RdRp показывают, что высокие концентрации RdRp или вирусной матрицы инициируют переключение от транскрипции к репликации и что высокие концентрации источника кэпа переключают полимеразу с репликации на транскрипцию.
Экспериментальные процедуры
Плазмиды
конструкций pcDNA, кодирующих субъединицы PA, PB1 и PB2, использовали для трансфекции клеток 293T (описанных ниже). Конструкция PB2 содержит C-концевую TAP-метку. Плазмиды pcDNAPA, pcDNA-PB1 и pcDNA-PB2tap были щедрым подарком доктора Джорджа Г. Браунли из школы патологии сэра Уильяма Данна Оксфордского университета.
РНК
ВРНК 3 ‘концевой сегмент 5′-GGCCUGCUUUUGCU-3′, 5′-концевой сегмент вРНК 5’-AGUAGAAACAAGGCC-3 ‘, 3′-концевой сегмент кРНК 5′- GGCCUUGUUUCUACU — 3′ концевой сегмент 5′-кРНК 5’-AGCAAAAGCAGGCC-3 ‘и сегмент кРНК 5′-AGGGGGUUCCCC-3’ были приобретены у Dharmacon.Лиофилизированная мРНК кроличьего глобина была приобретена у Sigma.
Получение и частичная очистка полимеразы гриппа
RdRp экспрессировали и очищали по существу, как описано ранее (21, 22). Плазмиды pcDNA-PA, pcDNA-PB1 и pcDNAPB2-TAP были трансфицированы в клетки 293T с использованием реагента для трансфекции Lipofectamine 2000 (Invitrogen) для получения WT RdRp, в то время как только pcDNA-PB1 и pcDNA-PB2-TAP были трансфицированы для получения –PA RdRp. . Через 48 часов после трансфекции клетки собирали и лизировали в буфере для лизиса (50 мМ HEPES, pH 8.0, 25% глицерина, 0,5% NP40, 40 мМ NaCl и 10 мМ 2-меркаптоэтанола), содержащий Complete-Mini, таблетку-коктейль с ингибитором протеазы без ЭДТА (Roche). После центрифугирования лизата клеточный супернатант добавляли к шарикам IgG Sepharose 6 Fast Flow (GE Healthcare) в связывающем буфере (10 мМ HEPES pH 8,0, 10% глицерин, 0,1% NP40, 150 мМ NaCl и 50 мкМ PMSF) и Полимераза была частично очищена с использованием сайта связывания белка-A, генетически кодируемого в теге TAP конструкции PB2.Полимеразу элюировали в буфере для элюции (10 мМ HEPES pH 8,0, 10% глицерин, 0,1% NP40, 150 мМ NaCl, 50 мкМ PMSF и 1 мМ DTT) из шариков протеазой вируса травления табака, которая использует сайт расщепления TEV. отделение тега Protein-A от субъединицы PB2 (21, 22). Частично очищенную полимеразу анализировали с помощью окрашивания серебром и анализа Брэдфорда для оценки чистоты и концентрации, соответственно, и хранили при -20 ° C в 45% глицерине.
Анализ транскрипции / вРНК → репликации кРНК
Анализы (6 мкл) выполняли в основном, как описано ранее (8), и содержали 16 нМ частично очищенной полимеразы, 200 мкМ DTT, 5 мМ MgCl 2 , 1 ед. / Мкл РНКазы OUT ( Invitrogen), 1 мМ АТФ, 500 мкМ CTP, 500 мкМ UTP, 1 мкМ GTP, 0.15 мкМ [α- 32 P] GTP (3000 Ки / ммоль), 1,8 нг / мкл (14 нМ) мРНК глобина (Invitrogen), 650 нМ 3 ‘концевого сегмента вРНК и 650 нМ 5’ концевого сегмента вРНК, если не указано иное . Их инкубировали при 30 ° C и гасили загрузочным буфером геля (90% формамид). Продукты анализировали на 30% полиакриламидном геле и количественно оценивали на Typhoon Phosphorimager с использованием программного обеспечения Image Quant (Molecular Dynamics).
кРНК → вРНК анализ репликации
Анализы (6 мкл) выполняли в основном, как описано ранее ((21)), и содержали 16 нМ частично очищенной полимеразы, 200 мкМ DTT, 5 мМ MgCl 2 , 1 ед. / Мкл РНКазы OUT ( Invitrogen), 500 мкМ АТФ, 500 мкМ GTP, 500 мкМ UTP, 1 мкМ CTP, 0.15 мкМ [α- 32 P] CTP (3000 Ки / ммоль), 650 нМ 3 ’конца сегмента кРНК и 650 нМ 5’ конца сегмента кРНК, если не указано иное. Их инкубировали при 30 ° C и гасили загрузочным буфером геля (90% формамид). Продукты анализировали на 30% -ном полиакриламидном геле и количественно оценивали на Typhoon Phosphorimager с использованием программного обеспечения Image Quant.
Результаты
Полимераза гриппа отвечает как за репликацию генома РНК гриппа, так и за транскрипцию его мРНК; однако вопрос о том, как полимераза регулирует эти две функции, остается в основном без ответа.Таким образом, мы исследовали влияние концентраций кэп-источника, полимеразы и вРНК на репликацию и транскрипцию с помощью анализа транскрипции / репликации, который мог одновременно обнаруживать как транскрипцию (вРНК → мРНК), так и репликацию (вРНК → кРНК) из матрицы вРНК и анализ репликации кРНК → вРНК. Анализы содержали 3-субъединичную полимеразу, полученную из рекомбинантных субъединиц PA, PB1 и PB2, сегменты РНК длиной 14 и 15 нуклеотидов, которые служили консервативными 3 ‘и 5’ концами вРНК или матрицы кРНК, [α- 32 P] NTP для метки организмом различных продуктов, и, если они есть, мРНК кроличьего глобина использовалась в качестве источника 7-метилгуаназин-5′-кэпа.Важно отметить, что продукты транскрипции и репликации можно легко дифференцировать из-за их очень разной длины. Продукты репликации будут иметь длину около 14 или 15 нуклеотидов, длину 3′-конца поставляемой вРНК или кРНК соответственно, и для их синтеза требуются как 3′-конец, так и 5′-конец их соответствующей матрицы, а также все три субъединицы RdRp ( ). Отсутствие CTP, третьего нуклеотида, необходимого для репликации, приводит к продукции динуклеотида (pppApG), но больше не продуктов репликации (данные не показаны).Продукты транскрипции будут иметь длину около 28 нуклеотидов, длина 3 ’конца вРНК плюс кэпированный праймер, оторванный от мРНК глобина, и для их синтеза требуются оба конца матрицы вРНК, мРНК глобина и все три субъединицы RdRp ().
Идентификация продуктов репликации и транскрипции. Панель А: активность транскрипции и репликации вРНК → кРНК анализировали в присутствии 650 нМ 3′-конца vRNA (дорожки 1, 3, 4 и 5), 650 нМ 5′-конца vRNA (дорожки 2-5) и 1,8 нг. / мкл мРНК глобина (дорожки 4 и 5) с использованием частично очищенного WT RdRp, содержащего субъединицы PA, PB1 и PB2-TAP (дорожки 1-4), или частично очищенного –PA RdRp, содержащего только субъединицы PB1 и PB2-TAP (дорожка 5 ), как описано в экспериментальных процедурах.Панель b: активность репликации кРНК → вРНК анализировали в присутствии 650 нМ 3′-конца кРНК (дорожки 1, 3, 4 и 5), 650 нМ 5′-конца кРНК (дорожки 2-5) и 1,8 нг / мкл. мРНК глобина (дорожки 4 и 5) с использованием частично очищенного WT RdRp, содержащего субъединицы PA, PB1 и PB2-TAP (дорожки 1-4), или частично очищенного –PA RdRp, содержащего только субъединицы PB1 и PB2-TAP (дорожка 5) в качестве описано в экспериментальных процедурах. Положения маркеров размера 14, 20 и 49 нуклеотидов показаны справа, а продукты транскрипции (T), продукты репликации (R) и неизвестные продукты (*) указаны слева.
Высокие концентрации источника кэпа мРНК вызывают переключение от репликации к транскрипции
Сначала мы исследовали, как изменение концентрации источника кэпа мРНК влияет на соотношение транскрипция / репликация путем титрования мРНК глобина в анализах транскрипции / репликации с помощью мРНК глобина. действует как источник 7-метилгуанозин-5′-кэпа гриппозной полимеразы. Когда концентрация мРНК глобина увеличивалась с 0 до 3 нг / мкл, соотношение транскрипция / репликация также возрастало ().Увеличение соотношения транскрипция / репликация было связано как с увеличением транскрипции, так и с уменьшением репликации, что указывает на то, что при более высоких концентрациях клеточной мРНК полимераза будет отдавать предпочтение транскрипции над репликацией ().
Влияние концентрации источника кэпа на транскрипцию и репликацию. Источник кэпа титровали в анализах транскрипции / репликации с использованием вРНК (панели a и b) или кРНК (панель c) в качестве матрицы; анализы были выполнены, как описано в экспериментальных процедурах.Панель а: влияние на соотношение транскрипции и репликации. Панель b: количество продуцируемых кРНК (•) или продуктов транскрипции (○) (пмоль мин -1 × 10 7 ). Панель c: Влияние источника кэпа на репликацию кРНК → вРНК на количество продуцируемых продуктов вРНК (пмоль мин -1 × 10 7 ). Показанные фигуры являются отдельными представителями двух отдельных экспериментов.
Снижение репликации вРНК → кРНК при более высоких концентрациях источника кэпа повышает вероятность того, что высокие концентрации источника кэпа также будут ингибировать репликацию кРНК → вРНК, тем самым подавляя всю схему репликации вРНК → кРНК → вРНК.Чтобы исследовать последнюю половину репликационного пути, мы титровали мРНК глобина в тесте репликации кРНК → вРНК. Опять же, увеличение концентрации мРНК глобина ингибировало репликацию (). Таким образом, более высокие концентрации мРНК способствуют транскрипции над репликацией за счет ингибирования обеих половин цикла репликации, вРНК → кРНК и кРНК → вРНК, а также за счет увеличения транскрипции.
5 ’конец матрицы вРНК помогает регулировать соотношение транскрипции к репликации
Мы исследовали влияние изменения концентрации вРНК на транскрипцию и репликацию.ВРНК служит матрицей как для репликации, так и для транскрипции, и ее концентрация сильно варьируется в течение цикла заражения — низкая при начальной инфекции и высокая на более поздних стадиях. Увеличение концентрации вРНК в анализе, который поддерживает как транскрипцию, так и репликацию, привело к снижению продукции мРНК наряду с увеличением репликации вРНК на кРНК. Таким образом, концентрация вРНК может изменять соотношение транскрипции / репликации, так что более высокие концентрации вРНК вызывают переключение от транскрипции к репликации ().
Влияние вРНК на транскрипцию и репликацию вРНК → кРНК. 3 ‘и 5’ концы вРНК (панель a), 3 ‘конец вРНК (панель b), конец vRNA 5’ (панель c) и контрольная, xRNA (панель d) титровали в анализах транскрипции / репликации, которые были выполняется, как описано в экспериментальных процедурах. Панели слева отображают соотношение транскрипции к репликации при добавлении указанной РНК. Панели справа показывают абсолютные количества продуцируемых кРНК (•) и продуктов транскрипции (○) (пмоль мин -1 × 10 7 ).Показанные фигуры являются отдельными представителями двух отдельных экспериментов.
Как 3 ’, так и 5’ концы матрицы vRNA должны связываться с полимеразой гриппа до начала транскрипции или репликации (23-25). Это поднимает вопрос о том, требуется ли 3 ’конец, 5’ конец или оба конца вРНК для регулирования отношения транскрипции к репликации. В анализе восстановления транскрипции / репликации используются отдельные сегменты РНК для имитации концов вРНК (сегмент из 14 нуклеотидов для имитации 3’-конца и сегмент из 15 нуклеотидов для имитации 5’-конца).Таким образом, мы можем удерживать концентрацию одного конца постоянной, независимо изменяя концентрацию другого. Концентрация 3 ’конца вРНК не влияла на соотношение транскрипция / репликация, тогда как увеличение концентрации 5’ конца вРНК уменьшало соотношение транскрипция / репликация (). Эти данные устанавливают, что 5’-конец вРНК является регулятором переключения от транскрипции к репликации.
Контрольная РНК не влияет на переключение между репликацией и транскрипцией
Чтобы предоставить дополнительные доказательства того, что эффекты изменения концентраций вРНК и кэпированной мРНК не являются результатом неспецифических эффектов, мы исследовали кРНК, короткий олигорибонуклеотид, не связанный с грипп ().Как и ожидалось, контрольные эксперименты показали, что полимераза гриппа не может реплицировать или транскрибировать xRNA (данные не показаны). Титрование кРНК в анализах показало, что кРНК не влияла на транскрипцию вРНК, репликацию вРНК → кРНК () или репликацию кРНК → вРНК (данные не показаны). Эти данные указывают на то, что эффекты матрицы вРНК и источника кэпа мРНК являются результатом конкретной последовательности и / или химических свойств 5’-конца вРНК и источника кэпа.
Таблица 1
Таблица последовательностей РНК, используемых в анализах транскрипции / репликации.
| Имя РНК | Последовательность РНК | ||||
|---|---|---|---|---|---|
| 3′-конец вРНК | 5′-GGCCUGCUUUUGCU-3 ‘ | ||||
| 5′-конец vRNA | 5′-AGUAGCC | 5′-AGUAGCC | 5′-AGUAGCC | кРНК 3 ‘конец | 5′- GGCCUUGUUUCUACU — 3′ |
| кРНК 5 ‘конец | 5′- AGCAAAAGCAGGCC — 3′ | ||||
| xRNA | 5′- AGGGGGUCC | 5′- AGGGGGUCC | 5′- AGGGGGUCC | вРНК оказывает незначительное влияние на репликацию кРНК для вРНК Затем мы исследовали влияние концентрации вРНК на реакцию репликации кРНК → вРНК.В отличие от эффектов увеличения концентрации вРНК на реакцию репликации вРНК → кРНК, увеличение концентрации 3 ‘конца, 5′ конца или обоих концов матрицы вРНК мало влияло на скорость репликации кРНК → вРНК до тех пор, пока концентрации вРНК были равны или превышали концентрацию кРНК (). В этот момент репликация была сильно подавлена, что, скорее всего, было результатом гибридизации 3′-конца матрицы вРНК с комплементарным 5′-концом матрицы кРНК и / или гибридизации 5′-конца матрицы вРНК с комплементарным 3’-концом. матрицы кРНК ().Предположительно, как только вРНК была отожжена с ее аналогом кРНК, кРНК больше не была доступна для использования полимеразой в качестве матрицы для репликации. Мы проверили эту гипотезу, повторив эти эксперименты с половиной исходной концентрации матрицы кРНК. Концентрация вРНК, необходимая для сильного ингибирования, также снизилась наполовину, что согласуется с сильным ингибированием в результате гибридизации вРНК и кРНК (данные не показаны). Эти данные предполагают, что концентрация матрицы вРНК оказывает небольшое прямое влияние на репликацию кРНК в вРНК. Влияние вРНК на репликацию кРНК → вРНК и кРНК на соотношение транскрипция / репликация. Панель a: 3 ’конец (•), 5’ конец (○) и оба 3 ’и 5’ концы (▲) титровали в анализах репликации кРНК → вРНК. График показывает количество продуцируемой вРНК (пмоль мин -1 × 10 7 ). Панель b: 3 ’конец (•), 5’ конец (○) и оба 3 ’и 5’ концы (▲) титровали в анализах репликации / транскрипции с использованием матрицы вРНК. График отображает отношение транскрипции к репликации.Анализы выполняли, как описано в экспериментальных процедурах. Показанные фигуры являются отдельными представителями двух отдельных экспериментов. Матрица кРНК не влияет на соотношение транскрипция / репликацияЧтобы определить, влияет ли концентрация кРНК на относительные количества транскрипции и репликации на матрице вРНК, мы титровали кРНК в анализах транскрипции / репликации. Концентрация 3′-конца, 5′-конца или обоих концов кРНК мало влияла на соотношение транскрипция / репликация до тех пор, пока концентрация кРНК не стала равной или превышающей концентрацию вРНК, после чего как репликация, так и транскрипция были полностью заблокирован ().Это сильное ингибирование при эквимолярных концентрациях вРНК и кРНК, скорее всего, было результатом гибридизации концов вРНК с концами кРНК из-за их комплементарности, как описано выше. Кроме того, эти данные предполагают, что концентрация матрицы кРНК не играет роли в контроле переключения между транскрипцией и репликацией. Полимераза может переключаться между репликацией и транскрипциейЧтобы определить, может ли фермент, участвующий в репликации, переключиться на транскрипцию, мы инкубировали полимеразу с матрицей вРНК и без источника кэпа в анализе транскрипции / репликации, тем самым позволяя работать только полимеразе. в режиме репликации.Через 10 минут реакционная смесь была разделена на 3 аликвоты, которые содержали различные концентрации мРНК глобина (от 0,9 нг / мкл до 5,4 нг / мкл), и количество продуктов транскрипции и репликации определялось в течение дополнительных 75 минут. Аликвоты, содержащие более высокие концентрации мРНК глобина, имели повышенные отношения транскрипции / репликации по сравнению с аликвотами, содержащими более низкие концентрации мРНК глобина (), как из-за увеличения количества транскрипции, так и из-за уменьшения количества репликации (данные не показаны).Таким образом, RdRp может переключаться с чисто репликационного режима на транскрипционный, а более высокие концентрации источника кэпа приводят к более обширному переключению в режим транскрипции. Переключение RdRp между транскрипцией и репликацией. Панель а: анализ репликации вРНК → кРНК инкубировали в течение 10 минут перед разделением на три аликвоты и добавлением мРНК глобина до различных конечных концентраций: 0,9 нг / мкл (•), 1,8 нг / мкл (○) и 5,4 нг / мкл (▲) ). Анализу давали возможность инкубироваться в течение еще 75 минут и количественно определяли продукты.Панель b: анализ транскрипции / репликации с начальной концентрацией 650 нМ вРНК инкубировали в течение 10 минут перед разделением на четыре аликвоты, и в каждую добавляли разные количества вРНК, чтобы получить конечные концентрации: 650 нМ (•), 1500 нМ (○), 2500 нМ (▲) и 5000 нМ (). Анализу давали возможность инкубироваться в течение дополнительных 75 минут и количественно определяли продукты. Графики отображают отношение транскрипции к репликации. Анализы выполняли, как описано в экспериментальных процедурах.Показанные фигуры являются отдельными представителями двух отдельных экспериментов. вРНК может переключать полимеразу с транскрипции на репликацию. . Через 10 минут реакционная смесь была разделена на 4 аликвоты с различными конечными концентрациями вРНК (от 650 нМ до 5000 нМ).Аликвоты, содержащие более высокие концентрации вРНК, имели пониженные отношения транскрипции / репликации () как из-за увеличения скорости репликации, так и из-за снижения скорости транскрипции (данные не показаны). Таким образом, увеличение концентрации вРНК может переключить полимеразу, участвующую в транскрипции, в режим репликации.Повышенная концентрация полимеразы приводит к переключению от транскрипции к репликацииНаконец, мы исследовали, как изменение концентрации полимеразы гриппа влияет на соотношение транскрипция / репликация.Это представляло интерес, поскольку при первоначальном заражении концентрация полимеразы будет очень низкой, в то время как на более поздних стадиях концентрация будет намного выше. Мы титровали полимеразу гриппа в анализах транскрипции / репликации и обнаружили, что по мере увеличения концентрации полимеразы количество продуктов репликации увеличивается пропорционально. Напротив, продукция продуктов транскрипции увеличивается лишь незначительно, что приводит к снижению соотношения транскрипция / репликация при более высоких концентрациях полимеразы по сравнению с более низкими концентрациями ().Это указывает на то, что по мере увеличения концентрации полимеразы фермент синтезирует больше продуктов репликации по сравнению с продуктами транскрипции. Чтобы гарантировать, что переключение на репликацию не произошло из-за снижения мРНК глобина или какого-либо другого субстрата в ходе эксперимента, мы исследовали образование продуктов репликации и продуктов транскрипции в течение 90 минут при 43 нМ RdRp (). Количество как продуктов репликации, так и продуктов транскрипции линейно увеличивалось на протяжении всей 90-минутной реакции, указывая на то, что даже при самых высоких концентрациях RdRp количество субстратов не становится ограничивающим. Титрование RdRp в тесте транскрипции / репликации. RdRp титровали в анализе транскрипции / репликации, который выполняли, как описано в экспериментальных процедурах. Панель А: влияние концентрации RdRp на отношение транскрипции к репликации. Панель b: влияние концентрации RdRp на количество продуцируемых кРНК (•) или продуктов транскрипции (○) (пмоль мин -1 × 10 5 ). Панель c: динамика анализа транскрипции / репликации, проведенного при 43 нМ RdRp.Продукты представляют собой количество продуцируемых кРНК (•) или продуктов транскрипции (○) (пмоль мин -1 × 10 4 ). Показанные фигуры являются отдельными представителями двух отдельных экспериментов. ОбсуждениеПолимераза гриппа отвечает как за репликацию генома РНК вируса гриппа, так и за транскрипцию его мРНК. Мы обнаружили, что концентрации источника кэпа, вРНК и полимеразы гриппа играют роль в регуляции репликации и транскрипции.Мы также показали, что популяции полимеразы, которые реплицируют РНК, можно переключить на транскрипцию путем увеличения концентрации источника кэпа; аналогичным образом полимераза, транскрибирующая РНК, может быть переключена на репликацию путем увеличения концентрации вРНК. Эти данные предполагают, что полимераза гриппа переключается между репликацией и транскрипцией строго контролируемым образом и реагирует на несколько эффекторов. Высокие концентрации источника кэпа могут остановить весь путь репликации, поскольку репликация как вРНК → кРНК, так и кРНК → вРНК подавлялась, в то время как транскрипция стимулировалась в ответ на увеличение концентраций источника кэпа.Хотя возможно, что существует аллостерический сайт для источника кэп, отдельный от сайта связывания субстрата, это не требуется для учета данных. Напротив, RdRp может содержать единственный сайт привязки для источника кэпа. Как только полимераза связывает матрицу вРНК, возникает простая конкуренция за инициацию транскрипции посредством снятия кэпа по сравнению с инициацией репликации через связывание 2 NTP, необходимых для инициации синтеза кРНК. Например, если два NTP, необходимые для инициации репликации вРНК, связываются до кэпированной клеточной РНК, RdRp реплицирует вРНК.Однако, если кэпированная клеточная мРНК связывает полимеразу до двух NTP, это может заставить полимеразу инициировать транскрипцию путем расщепления кэпированной мРНК и полимеризации NTP на праймере. Альтернативно, обязательство к транскрипции может потребовать как связывания кэпированной мРНК с последующим отрыванием кэпа. Высокие концентрации вРНК, в частности 5 ’конца вРНК, заставляют RdRp переключаться в режим репликации. Мы предполагаем, что, поскольку полимераза гриппа должна уже быть связана с матрицей вРНК для репликации или транскрипции вРНК → кРНК, RdRp содержит дополнительный сайт связывания для вРНК, который отличается от сайта связывания субстрата.3 ’конец вРНК, 3’ конец кРНК, 5 ’конец кРНК или xRNA не могли индуцировать RdRp для переключения в сторону репликации, что указывает на то, что этот сайт имеет специфичность последовательности для 5’ конца матрицы вРНК. Связывание 5′-конца вРНК с аллостерическим сайтом может вызывать конформационные изменения в полимеразе, которые ингибируют связывание источника кэпа, что блокирует полимеразу в репликационном режиме до тех пор, пока 5′-конец вРНК связан. . Альтернативно, 5’-конец вРНК может связываться с сайтом связывания кэпа RdRp и напрямую препятствовать связыванию полимеразы с источником кэпа, необходимым для транскрипции. Недавно Perez et al. Сообщили о существовании малых вирусных РНК гриппа (svRNA) с последовательностями, соответствующими 5’-концам сегментов vRNA. Зараженные клетки будут содержать два источника 5 ’концов вРНК — саму вРНК и svRNA. Введение антисмысловой заблокированной нуклеиновой кислоты, комплементарной svRNA, в инфицированные гриппом клетки вызвало нарушение регуляции синтеза мРНК, кРНК и vRNA (26), что согласуется с 5′-концом матрицы vRNA, играющим важную роль в регуляции полимеразы вируса гриппа. .Таким образом, эти svRNA могут быть фактическим регулятором переключения от транскрипции к репликации. (Примечание: в этих исследованиях на целых клетках антисмысловая заблокированная нуклеиновая кислота будет связана как с сегментами вРНК, так и с svRNA, поэтому строго невозможно определить, являются ли эффекты антисмысловой нуклеиновой кислоты результатом связывания с svRNA. , вРНК или обе svRNA и вРНК.) Повышение концентрации RdRp подталкивает полимеразу к синтезу большего количества продуктов репликации по сравнению с продуктами транскрипции, предполагая, что RdRp может самоассоциироваться в олигомеры.Недавно Huet и др. Наблюдали образование олигомеров RdRp в живых клетках с помощью флуоресцентной кросс-корреляционной спектроскопии, а Jorba и др. Также обнаружили олигомеры RdRp с помощью анализа гель-фильтрации (27, 28). Следовательно, образование этих олигомеров, вероятно, играет ключевую роль в регулировании того, продуцирует ли RdRp вирусную мРНК или реплицирует вирусный геном. Хотя вполне вероятно, что в этой регуляции участвует олигомеризация трех субъединиц RdRp, мы не можем сбрасывать со счетов возможность того, что только одна из трех субъединиц полимеразы ответственна за переключение. Когда грипп начинает инфицирование клетки, для вируса было бы выгодно быстро производить вирусный аппарат, необходимый для отражения иммунных ответов от хозяина, репликации собственного генома и упаковки возникающих виронов. Для этого потребуется, чтобы вирусная полимераза в первую очередь продуцировала мРНК на ранней стадии заражения. На более поздних стадиях инфекции, когда вирусные компоненты были продуцированы, вирус может сосредоточиться на репликации своего генома, а полимераза может переключиться на репликацию как кРНК, так и вРНК. В соответствии с этими идеями, предыдущие исследования показали, что на ранних стадиях инфекции происходит накопление мРНК гриппа и очень мало кРНК или вРНК, что означает, что полимераза гриппа находится в основном в транскрипционном режиме в начале инфекции. На последних стадиях инфекции концентрации кРНК и вРНК увеличиваются (15-17), что позволяет предположить, что RdRp переключился в репликационный режим. Важно отметить, что описанные выше результаты точно предсказывают такое переключение. Мы обнаружили, что высокие концентрации источника кэпа переключают полимеразу гриппа в режим транскрипции. Было показано, что RdRp связывается с РНК-полимеразой II, когда карбоксиконцевой домен эукариотической полимеразы гиперфосфорилируется, что дает ему доступ к локально высоким концентрациям источника кэпа (29). Таким образом, на ранних стадиях инфекции RdRp будет иметь доступ к этим локально высоким концентрациям источника кэпа, в то время как концентрации vRNA и RdRp будут низкими по сравнению с уровнями, обнаруженными позже при инфицировании; в этих условиях RdRp в первую очередь транскрибирует вирусную мРНК.Vreede et al. Представили доказательства того, что полимераза гриппа опосредует убиквитинирование РНК-полимеразы II, тем самым приводя к деградации полимеразы хозяина через протеасомы (30, 31). Эта деградация должна значительно снизить концентрацию источника кэпа хозяина, доступного для RdRp, тем самым уменьшая количество транскрипции и увеличивая количество репликации. По мере прогрессирования инфекции концентрации всех вирусных белков увеличиваются в ответ на накопление вирусной мРНК, с увеличением концентраций RdRp и NP, впоследствии защищающих формирующуюся кРНК от деградации.Недавно защищенная кРНК теперь может использоваться в качестве матрицы для производства большего количества вРНК и / или svRNA. Важно отметить, что эта повышенная концентрация vRNA будет приводить к переключению RdRp в репликационный режим. SvRNA, состоящие из 5’-конца сегментов vRNA, также, вероятно, будут способствовать этому эффекту. Хотя неизвестно, как концентрация svRNA изменяется во время цикла заражения, можно было бы ожидать, что они увеличатся, поскольку их продукция предположительно зависит от присутствия кРНК. Таким образом, возрастающие уровни вРНК и svRNA служат петлей положительной обратной связи для еще большего производства вРНК.Увеличение концентрации RdRp во время цикла заражения также может приводить к самоассоциации полимеразы, дополнительно усиливая переключение в сторону репликации. Регулирование относительных количеств транскрипции по сравнению с репликацией почти наверняка включает процессы, отличные от описанных выше. Vreede et al. предложили модель стабилизации, согласно которой на ранних стадиях инфицирования полимераза синтезирует как кРНК, так и мРНК. Однако продукт репликации, кРНК, не защищен белками и быстро разрушается нуклеазами хозяина, в то время как 7-метилгуанозиновый 5 ’кэп и полиаденилированный хвост мРНК защищают его от деградации и позволяют экспортировать его из ядра.На более поздних стадиях инфицирования мРНК будет транслироваться с образованием большого количества RdRp и нуклеопротеинов, которые связываются с кРНК и стабилизируют ее от деградации (19, 20). Эта модель стабилизации также поможет учесть раннее накопление мРНК с последующим накоплением кРНК (и вРНК) позже при инфицировании. Робб и др. Сообщили, что белок NS2 гриппа играет роль в регуляции полимеразы гриппа, уменьшая соотношение продуктов транскрипции / репликации (18).Кажется, что NS2 гриппа и RdRp оба являются регуляторами в петле отрицательной обратной связи, где полимераза гриппа будет транскрибировать вирусную мРНК, которая затем будет использоваться для трансляции вирусных белков, включая NS2 и RdRp; как только уровни NS2 и RdRp становятся достаточно высокими, они переводят RdRp из транскрипционного режима в репликативный. суммирует эффекты различных вРНК, кэпированной клеточной мРНК и RdRp на относительные скорости транскрипции и репликации. На ранних стадиях инфекции наблюдаются низкие уровни вРНК и RdRp и локально высокие концентрации кэпированной клеточной мРНК.Повышенная концентрация источника кэпа сигнализирует об увеличении продукции продуктов транскрипции при ингибировании репликации как вРНК → кРНК, так и кРНК → вРНК, тем самым увеличивая скорость транскрипции и, следовательно, скорость, с которой накапливаются вирусные белки. На более поздних стадиях инфекции наблюдается снижение концентрации кэпированной клеточной мРНК и повышение уровней как вРНК, так и RdRp, оба из которых сигнализируют о снижении скорости транскрипции и усилении репликации.В сочетании с другими сообщенными регуляторными механизмами, описанными выше, ясно, что грипп разработал удивительно сложную регуляторную сеть для обеспечения соответствующих уровней вирусной мРНК, необходимой для продукции белка, и вРНК, которые будут одновременно служить субстратом и упаковываться в новые вирусные частицы. . В самом деле, неудивительно, если в будущих исследованиях сообщат о существовании дополнительных вирусных факторов и факторов хозяина, которые регулируют скорость и баланс между транскрипцией и репликацией. На вирусный рибонуклеопротеиновый комплекс (vRNP) можно повлиять, чтобы он принял режим транскрипции, увеличив концентрацию источника кэпа, тогда как повышенные концентрации vRNA и вирусной полимеразы повлияют на переключение в сторону репликации. |